仪器简介：

采用钙离子荧光探针对细胞内钙离子等信使物质进行定量测定是研究细胞分泌活动的重要技术手段。其基本原理是: 用荧光探针标记样本中的钙离子，根据样本中的荧光探针特性单色光源发出单色光,诱发出荧光。然后根据传感器检测到的荧光特性即可分析样本中的钙离子浓度。测量时一般采用单波长法和双波长比率测量法，因双波长比率法的灵敏性和方便得到更广泛的应用，其原理是：探针与钙结合后不仅产生荧光强度的变化，而且有激发光或发射光谱偏移。激发峰偏移者进行双激发比例荧光测量，如fura-2；发射峰偏移者进行双发射比例荧光测量，如indo-1。一般选择对钙离子敏感而荧光强度变化相反的两个波长，如fura-2的340/380，可获得最大的比值。应用荧光分光光度仪、荧光显微镜系统，光电倍增器检测或增强照相机检测，即可获得校准的细胞内Ca2+浓度。还有其他一些指示剂在不同的实验中也得到了应用。

Fura-2: 双波长340/380nm激发; 单波长510nm Ca++测量 

Fura-3: 单波长490nm激发; 单波长530nm Ca++测量

Indo-1: 单波长350nm激发; 双波长405/480nm pH测量 

BCECF: 双波长430/480nm激发; 单波长530nm pH测量

仪器特点： 

1. 倒置荧光显微镜：Nikon Ti-U，用于将激发光聚焦于标本面诱发荧光，并收集离子信号。

2. 单色光源： Till Polychrome V, ms 级单色激发光源，实现激发波长的高速切换。

3. 荧光采集系统：Andor iXon Ultra 897 EMCCD，进行荧光信号的高灵敏度记录。